分離提取自鱟血的鱟試劑（Limulus Amebocyte Lysate，美洲鱟試劑，簡稱LAL），是一種歷史悠久、使用廣泛的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測試劑，被各國藥典所認(rèn)可。Lonza品牌的內(nèi)毒素檢測用鱟試劑產(chǎn)品，已有近40年的研發(fā)應(yīng)用歷史，并獲得了美國FDA認(rèn)證（License No.1775）。

目前，北京澤平代理的LONZA品牌提供多種檢測方法的鱟試劑產(chǎn)品，包括美洲鱟試劑（LAL）、不依賴于鱟血的重組C因子試劑，以及配套使用的酶標(biāo)儀、熒光檢測儀，提供符合FDA Part 11的內(nèi)毒素檢測專用軟件等，可實現(xiàn)0.005-100EU/mL范圍的內(nèi)毒素定性、定量檢測。


一、動態(tài)顯色法鱟試劑

Lonza動態(tài)顯色法鱟試劑（Kinetic-QCL Kinetic Chromogenic LAL Assay，簡稱KQCL），是一種動態(tài)、定量檢測內(nèi)毒素的試劑盒。在內(nèi)毒素的存在下，動態(tài)顯色法鱟試劑將無色的發(fā)光短肽底物中的顯色基團PNA切下，使溶液呈現(xiàn)，顏色變化的時間和內(nèi)毒素含量呈負(fù)相關(guān)，通過檢測分光光度計405nm下的光密度OD值變化，繪制內(nèi)毒素濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計算出未知樣本中的內(nèi)毒素含量。

Lonza動態(tài)顯色法鱟試劑，是Lonza最靈敏的內(nèi)毒素檢測試劑，無需形成凝膠，相比凝膠法、濁度法，受到的抑制反應(yīng)更少，抗干擾能力最強，檢測范圍廣（405nm處吸光的深樣品不可用），其0.005-50EU/mL的靈敏度，非常適合生物制品如疫苗、抗生素等檢測。

使用時，將混合有鱟試劑和底物的凍干粉復(fù)溶，放入96孔板中，加入待測樣品，在405nm吸光度檢測顏色變化，動態(tài)監(jiān)控其顯色反應(yīng)時長，反應(yīng)時間約1小時后（根據(jù)內(nèi)毒素限值而定），計算樣品內(nèi)毒素含量。
 


 
 
二、動態(tài)濁度法鱟試劑

Lonza動態(tài)濁度法鱟試劑（PYROGENT-5000 Kinetic Turbidimetric LAL Assay），是一種動態(tài)、定量檢測內(nèi)毒素的試劑盒。內(nèi)毒素存在下，動態(tài)濁度法鱟試劑形成凝膠，使溶液變渾濁，濁度變化的時間與內(nèi)毒素含量成反比，通過檢測吸光度變化時間，建立內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計算出未知樣品中的內(nèi)毒素含量。

Lonza動態(tài)顯色法鱟試劑，靈敏度0.01-100EU/mL，檢測范圍大，可以檢測有色樣品，按照美國FDA相關(guān)許可生產(chǎn)，當(dāng)檢測水和大容量液體時更具性價比。

使用時，將鱟試劑和緩沖液混合，置于中37℃孵育，添加樣品混勻后，動態(tài)檢測濁度變化，反應(yīng)時間約1小時后（根據(jù)內(nèi)毒素限值而定），計算樣品內(nèi)毒素含量。



 

三、重組C因子熒光檢測試劑盒

Lonza PyroGene重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒（PyroGene Recombinant Factor C Endpoint Fluorescent Assay），是一種終點法、定量檢測內(nèi)毒素的試劑。其不含鱟血成分，是LAL鱟試劑的可持續(xù)替代方案。C因子是鱟試劑酶促反應(yīng)中的第一個組成部分，重組生產(chǎn)的C因子（rFC），在內(nèi)毒素存在下被激活，不激活LAL級聯(lián)反應(yīng)中的其他酶，而是直接裂解熒光底物，釋放熒光，建立內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計算樣品的內(nèi)毒素含量。

Lonza重組C因子熒光檢測試劑盒，采用終點分析法，高通量分析更簡單，熒光信號范圍廣，只需一步反應(yīng)，靈敏度0.005-5EU/mL，消除了葡聚糖的假陽性，具有更高的內(nèi)毒素特異性，非動物源成分，批次間差異小，重復(fù)性高。繼歐洲藥典（EP）、日本藥典(JP)、美國藥典(USP)之后，第4版本的中國藥典將重組C因子法列為細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法，并在2020年生效。

使用時，Lonza重組C因子試劑為液態(tài)，可按需取用不會浪費試劑，在96孔板中與待測樣品混合，孵育1小時，使用380/440nm的激發(fā)/發(fā)射波長，計算樣品內(nèi)毒素含量。



 

四、終點顯色法鱟試劑

Lonza終點顯色法鱟試劑(QCL-1000 Endpoint Chromogenic LAL Assay)，是一種終點法、定量檢測內(nèi)毒素的試劑，是Lonza鱟試劑中最快速的檢測方法。在內(nèi)毒素存在下，終點顯色法鱟試劑分解底物，使溶液變?yōu)�，測定405-410nm下的OD值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計算樣品內(nèi)毒素含量。

Lonza終點顯色法鱟試劑，16分鐘快速檢測，僅需一個多道移液器、一個干熱裝置和一個96孔板。將樣品加入96孔板，37℃孵育10分鐘，添加顯色底物，37℃孵育6分鐘，添加終止緩沖液，測定405-410nm OD值。
 




五、凝膠法鱟試劑

Lonza凝膠法鱟試劑(PYROGENT  Gel Clot LAL Assay)，是一種內(nèi)毒素的限量檢測方法。將鱟試劑和樣品置于37℃水浴或金屬浴中的試管中，孵育1小時，將試管翻轉(zhuǎn)180°，如凝塊牢固地附著在試管底部，表明內(nèi)毒素為陽性。如凝塊向下流動，則內(nèi)毒素為陰性。

Lonza凝膠法鱟試劑提供0.03、0.06、0.125、0.25EU/mL的靈敏度，定量結(jié)果通過肉眼觀察凝膠形成，不需要復(fù)雜的儀器和軟件，簡便易讀，成本低。但實驗結(jié)果容易受到振動、溫度等干擾。

與其它酶促反應(yīng)一樣，凝膠法測定依賴于pH值。Lonza PYROGENT凝膠法鱟試劑包含的緩沖液，使測試前不需要調(diào)整樣品pH值。



 

六、內(nèi)毒素檢測儀器和軟件

1、WinKQCL內(nèi)毒素檢測軟件

Lonza專為內(nèi)毒素檢測設(shè)計的WinKQCL軟件，符合美國FDA 21 CFR Part 11對電子記錄和簽名、審計跟蹤和數(shù)據(jù)庫歸檔的技術(shù)要求，企業(yè)級的數(shù)據(jù)庫存儲模式，保障了數(shù)據(jù)完整性、真實性、安全性。趨勢分析功能，預(yù)判各批次內(nèi)毒素含量超標(biāo)情況，讓結(jié)果分析以及查找更高效。九種語言模式，中英界面快捷切換。能結(jié)合LIMS、LIS、MODA等實驗室信息管理系統(tǒng)，并可以在Citrix系統(tǒng)上操作。



支持大量常規(guī)酶標(biāo)儀：

①光吸收酶標(biāo)儀
BioTek ELx808
BioTek Eon
Molecular Devices SpectraMax 340PC,340PC384, Plus384 and 190PC
Molecular Devices VersaMax
Tecan Sunrise

②熒光酶標(biāo)儀
Lonza PyroWave
BioTek FLx800
Molecular Devices Gemini EM, Gemini XPS and Gemini XS

③多功能酶標(biāo)儀（光吸收和熒光酶標(biāo)儀）
BioTek Synergy 2
Molecular Devices SpectraMax M2, M2e, M3,M4, M5 and M5e
Molecular Devices FlexStation
 

2、ELx808酶標(biāo)儀

專業(yè)用于Lonza Kinetic-QCL動態(tài)顯色法鱟試劑、PYROGENT-5000動態(tài)濁度法鱟試劑的酶標(biāo)儀，并可作為標(biāo)準(zhǔn)分光光度計，用于QCL-1000終點顯色法鱟試劑檢測。96孔板全自動讀取，可存儲多達55個試劑盒、測試結(jié)果、標(biāo)準(zhǔn)曲線。優(yōu)秀的溫度均勻性，高精確性，根據(jù)鱟試劑優(yōu)化配置，已作為Lonza內(nèi)毒素檢測系統(tǒng)的一部分進行了驗證，可無縫對接WinKQCL軟件，用于內(nèi)毒素檢測的供應(yīng)商QC放行檢測。




3、PyroWave XM 熒光酶標(biāo)儀

專業(yè)用于Lonza PyroGene重組C因子熒光檢測試劑盒，并可作為光度計，可無縫對接WinKQCL軟件。具有優(yōu)秀的溫度均勻性，簡單易用，根據(jù)重組C因子優(yōu)化配置，用于內(nèi)毒素檢測的供應(yīng)商QC放行檢測。



 
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——Lonza中國一級代理商，北京澤平